Health Law, November 2024, Vol.32, No.6
唾液菌群的直接 PCR 扩增-高分辨率熔解曲线分析及其法医学应用
杨瑞 陈炯 赵贵森
河南科技大学法医学院，河南 洛阳 471023
摘要： 目的 建立一种基于直接 PCR 扩增和高分辨率熔解曲线分析的唾液菌群快速检测技术，评估其法医学应用价值。方法 离心收集唾液中的细菌后重悬于 Tris–EDTA 缓冲液，直接作为模板用于 16S rDNA V4 区的扩增和 HRM 曲线分析，即 dPCR–HRM，计算样本 HRM 图谱相对于参考图谱的判型置信度。以传统的试剂盒提取模板 DNA 后再行 PCR–HRM 为参考，验证 dPCR–HRM 的可信性。用 dPCR–HRM 法分析稀释唾液、稀释唾液斑和模板唾液滤纸样本，评估其灵敏度、分型能力和检材适应性。结果 dPCR–HRM 法可在 90 min 内得到唾液菌群的 HRM 图谱，与 kPCR–HRM 法之间的 GCP>95.85%。应用 dPCR–HRM 法，一般个体 0.29 mL 的唾液即可测得菌群 HRM 型。61 例唾液样本可分为 10 种型，8 h 之间的唾液斑与新鲜唾液分型相同（GCP>90.83%）。结论 dPCR–HRM 技术可用于唾液菌群的快速分型，且具有成本低、操作简单等优点。
关键词： 法医遗传学；高分辨率熔解；聚合酶链反应；唾液；菌群结构
中图分类号： DF795.2
文献标识码： A
文章编号： 2097-5058(2024)-06-0114-07
DOI： 10.19752/j.cnki.2097-5058.2024.06.019